Actividad específica de LDH para mini-proyecto parte 1
ELISA (ensayo inmunoenzimático) es una técnica de ensayo en placa diseñada para detectar y cuantificar sustancias solubles como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. También se utilizan otros nombres, como inmunoensayo enzimático (EIA), para describir la misma tecnología. En un ELISA, el antígeno (macromolécula diana) se inmoviliza en una superficie sólida (microplaca) y, a continuación, forma un complejo con un anticuerpo que está unido a una enzima informadora. La detección se lleva a cabo midiendo la actividad de la enzima informadora mediante la incubación con el sustrato adecuado para producir un producto medible. El elemento más crucial de un ELISA es una interacción anticuerpo-antígeno altamente específica. El siguiente artículo le guiará a través de las decisiones y opciones para construir un ELISA. También puede visitar nuestra herramienta de creación de ELISA, responder a una serie de preguntas y obtener recomendaciones sobre los componentes que mejor se adaptan a sus necesidades específicas de ELISA.Herramienta de creación de ELISA Buscar kits de ELISA Explorar protocolos de ELISA Explorar reactivos de ELISA
Vinculación no específica
La unión no específica (NSB) se refiere a la unión de un anticuerpo a proteínas, receptores o transportadores no deseados. Esta unión de anticuerpos de ensayo no está correlacionada con la especificidad de los anticuerpos.
La atracción de un anticuerpo primario o secundario a los receptores Fc (FcRs) se considera el principal contribuyente a los eventos de unión no deseados. En general, cuando un anticuerpo se une a proteínas no deseadas con epítopos considerablemente similares, se produce la no especificidad.
La unión inespecífica puede dar lugar a un falso positivo y, a su vez, repercutir negativamente en el diagnóstico y tratamiento adecuados de la enfermedad. En el caso de los ensayos de inmunodiagnóstico, un resultado falso positivo o falso negativo puede conducir a un diagnóstico erróneo de una enfermedad o afección y a decisiones terapéuticas inadecuadas. Los médicos y los pacientes dependen de la industria del diagnóstico in vitro (DIV) para desarrollar ensayos de alta calidad que ofrezcan resultados precisos de forma sistemática.
Las formulaciones MatrixGuard (con proteínas) y Assay Diluent (sin proteínas) ofrecen dos opciones que se pueden utilizar cuando se necesitan diferentes métodos para bloquear las interferencias de la matriz, manteniendo al mismo tiempo la utilidad clínica del ensayo.
Elisa de unión no específica
Un ensayo de unión a ligando (LBA) es un ensayo, o un procedimiento analítico, que se basa en la unión de moléculas de ligando a receptores, anticuerpos u otras macromoléculas[1]. Se utiliza un método de detección para determinar la presencia y el alcance de los complejos ligando-receptor formados, y esto suele determinarse electroquímicamente o mediante un método de detección por fluorescencia[2]. Este tipo de prueba analítica puede utilizarse para comprobar la presencia de moléculas diana en una muestra que se sabe que se unen al receptor[3].
Existen numerosos tipos de ensayos de unión a ligandos, tanto radiactivos como no radiactivos[4][5][6] Como tales, los ensayos de unión a ligandos son un superconjunto de los ensayos de radiounión, que son la inversa conceptual de los radioinmunoensayos (RIA). Algunos tipos más recientes se denominan ensayos de “mezcla y medida” porque no requieren la separación del ligando unido del no unido[5].
Los ensayos de unión de ligandos se utilizan principalmente en farmacología por diversas exigencias. En concreto, a pesar de los receptores, hormonas y otros neurotransmisores endógenos del cuerpo humano, los farmacólogos utilizan ensayos para crear fármacos que sean selectivos o imiten los componentes celulares que se encuentran de forma endógena. Por otra parte, estas técnicas también están disponibles para crear antagonistas de los receptores con el fin de evitar nuevas cascadas[7]. Estos avances proporcionan a los investigadores la capacidad no sólo de cuantificar las hormonas y los receptores hormonales, sino también de aportar información farmacológica importante en el desarrollo de fármacos y los planes de tratamiento[8].
Técnicas cromatográficas en fitoquímica – TLC, HPTLC
Muchos procesos bioquímicos, como el empaquetamiento, el mantenimiento y el control del ADN, dependen de interacciones proteína-ADN no específicas de secuencia. Las proteínas de unión no específica al ADN han evolucionado para tolerar una amplia gama de secuencias de ADN y, sin embargo, unirse con una afinidad respetable. El requisito de unión inespecífica contrasta con el impuesto, por ejemplo, a los factores de transcripción e implica una base estructural diferente para el proceso de reconocimiento biomolecular. Para abordar esta cuestión y el mecanismo de empaquetamiento del ADN arqueal, hemos determinado la estructura de la proteína Sso7d de Sulfolobus solfataricus en complejo con ADN. Sso7d se une al ADN colocando una lámina beta de triple cadena a través del surco menor del ADN. La proteína se ancla en esta posición mediante la inserción de cadenas laterales que ceden enlaces de hidrógeno en el surco y se estabiliza además mediante interacciones electrostáticas y no polares con la espina dorsal del ADN. Esta estructura explica cómo puede conseguirse una unión fuerte independientemente de la secuencia del ADN. La unión de Sso7d también distorsiona la conformación del ADN e introduce un desenrollamiento significativo de la hélice. Este efecto sugiere un mecanismo de empaquetamiento del ADN en Sulfolobus basado en el superenrollamiento negativo del ADN.